| 저자(한글) |
YOU, Lin-feng,YANG, Hai-xing,LIN, Jun-fang,LIU, Yong,YE, Zhi-wei,GUO, Li-qiong,XIN, Yan-hua |
| 초록 |
탁사디엔 생성효소(taxadiene synthase)는 택솔(Taxol) 합성 경로의 전구체이다. 택솔은 주목(Taxus taxol)의 중요한 2차대사 산물이며 신형 항암 약물이다. 그러나 택솔은 식물 가운데서 그 함량이 낮고 추출하는데 어려움이 있으므로 효율적으로 응용하기 힘들다. 유전자 공학 수단으로 담자균문(Basidomycota) 진균 재먹물 버섯(Coprinus cinereus)이 가진 내인성 이소프레노이드(isoprenoid) 합성 경로를 통하여 제라닐제라닐2인산염(Geranylgeranyl diphosphate, GGPP) 생성효소와 탁사디엔 생성효소(taxadiene synthase)를 함유한 융합 유전자 발현 벡터 pBgGGTS와 개별 유전자 발현 벡터 pBgGGgTS를 구축한 후 각각 재먹물 버섯 LT2 균주에 형질전환하였다. 선택성 선별, PCR 감정, Southern blotting 잡종 검증을 통하여 융합 발현된 재먹물 버섯 공정균 5주와 개별 발현된 재먹물 버섯 공정 균주 5주 얻었다. 임의로 공정 균주 1주를 선택하여 균사체와 발효액을 추출하여 각각 분석하였다. GC-MS 분석 결과, 2종 공정균주를 기존의 출발 균주와 비교했을 때 균사 추출물 피크 사이에 큰 차이가 없었다. 그러나 출발 균주의 발효액 추출물과 비교했을 경우, 2종 형질전환 재먹물 버섯의 발효액 피크 사이에 뚜렷한 차이가 존재하였다. GC-MS 특징적 질량(Characteristic mass) 이온 분석법으로 분석한 결과 탁사디엔으로 확인되었다. 그 수치가 각각 44 ng/L(pBgGGgTS로 형질전환)과 30 ng/L(pBgGGTS로 형질전환)이었다. 실험 결과, 재먹물 버섯의 융합 발현 혹은 개별 발현을 통하여 ggpps와 ts 유전자를 모두 발현하였다. 따라서 탁사디엔의 바이오 합성을 실현할 수 있다. |
