| 저자(한글) |
ZHANG, Shu-jun,ZHAO, Chen,DI, Jian-jun,MU, Sha-mo-li,XIAN, Ling-ling,YU, Na,HUANG, Jin |
| 초록 |
본 논문에서는 Neuritin의 피치아 파스토리스 발현계를 구축하여 대량의 활성을 가진 Neuritin 단백질을 확보함으로써 그 신경 생물학적 기능을 연구하였다. 연구는 우선, PCR로 인코딩한 neuritin 유전자 cDNA의 서열을 증폭시켜 정제 및 회수를 진행하였다. 다음으로, 효소 절단 및 연결을 통하여 이를 셔틀 벡터 pPIC9K 내에 삽입시킴으로써 대장균 DH5 alpha;를 형질전환하였다. 그 다음으로, PCR 및 서열 측정 등으로 이 neuritin-pPIC9k 재조합 플라스미드를 감정한 후, Sal Ⅰ 효소 절단법으로 그 선형화를 이루었으며 또한 전기 충격법으로 효모균 GS115을 형질전환하였다. 마지막으로, 선별 및 검증을 통하여, Neuritin의 피치아 파스토리스 발현계를 성공적으로 구축하였다. 그 결과, 메탄올로 그 발현을 유도하였고 SDS-PAGE과 Western blot 등으로 11kD의 Neuritin단백질을 분석하여 추출하였으며 또한 정제된 Neuritin 단백질을 PC12 세포 배양액 내에 첨가하여 그 신경돌기 성장(neurite growth)을 촉진하였다. |
