| 초록 |
TAT(세포막 투과성 펩티드)-Oct4(줄기세포 전사인자) 표적 유전자를 pET28a 발현벡터에 삽입시켜 재조합 발현 플라스미드 pET28a-TAT-Oct4를 구축하여 대장균 재조합 발현 시스템를 형성하였다. 융합단백질 TAT-Oct4는 대장균 중에서 주로 봉입체(inclusion body) 형식으로 발현되며, 또한 발현산물을 정제시킨 후, 순도는 90%이상에 달한다. 요소 농도기울기 투석(urea gradient dialysis)을 통하여 리폴딩(refolding)을 진행한 결과, TAT-Oct4의 평균 리폴딩 수율(average refolding field)은 8.8%에 달하였다. 세포면역형광 기술(Immunocytochemistry analysis)을 이용하여 분석한 결과, TAT-Oct4 융합 단백질은 모든 세포의 세포막을 투과할 수 있으며, 또한 세포막을 투과한 후 주로 세포핵내에 분포되어 있는 것으로 나타났다. 본 연구에서는 활성이 있는 TAT-Oct4 융합 단백질을 생물학적 방법으로 제조하는 방법을 구축하였으며, 또한 세포의 재조합에 대한 연구에 효과적인 연구자료를 제공하였다. 그리고 기타의 세포 재조합에 이용되는 줄기세포 전사인자의 설계에 실용적 방법을 제공하였다. |
