| 초록 |
【목적】기존에 선별한 P. aeruginosa PT121에서 생성된 유기용매 내성 프로테아제를 기반으로, 해당 프로테아제를 클로닝하고 발현한 후, 재조합 단백질의 효소학적 성질 및 작은 펩티드 합성에서 해당 단백질의 응용을 연구하였다. 【방법】참고 문헌에 보고된 유사 프로테아제 pseudolysin에 근거하여 프라이머를 설계하고 균주 PT121 유전체에서 유기용매 내성을 갖춘 프로테아제 PT121 유전자 lasB를 클로닝하였다. 유도 발현된 재조합 플라스미드 pET22b-lasB'를 구축하여 대장균에서 발현시켰다. 프로테아제 PT121의 효소학적 성질 및 작은 펩티드 합성에서 해당 프로테아제의 응용을 고찰하였다. 【결과】서열 분석 결과, lasB 유전자는 신호 펩티드, 프로펩티드(propeptide) 및 성숙 펩티드 등 3개 부분을 코딩할 수 있었으며, 성숙 펩티드에는 301개의 아미노산이 포함되었다. 분자량은 약 33 kDa였으며, 금속 단백질분해효소(metalloprotease) M4 패밀리에 속하였다. 파쇄 조건을 최적화하여, 원스텝법으로 비교적 순수한 재조합 프로테아제 PT121를 얻었는데, 그 비활성은 7,700 U/mg에 달하였다. 해당 효소는 비교적 높은 열안정성, pH 안정성 및 용매 내성을 나타냈으며, 야생균 P. aeruginosa PT121에서 생성된 프로테아제의 성질과 일치하였다. 50% DMSO 시스템에서 촉매작용을 효과적으로 발휘하여 다양한 작은 펩티드를 합성하였는데, 그 중 아스파탐(aspartame, Cbz-Asp-Phe-NH 2 ) 전구체 생성률은 91%에 달하였다. 【결론】프로테아제 PT121 유전자의 대장균 내 클로닝 및 발현은 관련 촉매작용 메커니즘 및 분자 수식을 한층 더 연구하는데 기반을 마련하였다. |
