| 저자(한글) |
DONG, Le,DAI, Cong-jie,WANG, Fang,WANG, Yun,ZHU, Guo-li,XIE, Xiao-bin,XU, Shan-shan,LIU, Can-yang,LIN, Ting |
| 초록 |
본 논문에서는 피자마(castor) 세포막 수분통로 단백질 PIP1.3의 수송 기능을 연구하기 위하여 RT-PCR 기술로 유전자 PIP1.3의 전체 길이 인코딩 구역 내의 cDNA 서열을 증폭했으며 해당 서열을 진핵 발현 벡터 pcDNA3.1/Myc-His A에 서브 복제(subcloning)하였다. 효소 절단, 서열 측정 분석 결과, 재조합 플라스미드 pcDNA3.1PIP1.3-Myc-His 해독틀은 정확하다. pcDNA3.1PIP1.3-Myc-His와 염화 이온을 연결한 민감성 녹색 형광 단백질 돌연변이체 (EYFP-H148Q-V163S)의 pcDNA3.1Hygro-EYFP-H148Q-V163S 재조합 플라스미드를 중국 햄스터 난소(Chinese hamster ovary, CHO) 세포에 안정적으로 형질전환한 후 RT-PCR와 Western blot 분석한 결과, PIP1.3의 mRNA와 단백질은 선택된 CHO 세포에서 높이 발현되였다. 형광법과 동위원소 표지한 14 C-글리세린(glycerin) 주입 실험을 통하여 해당 CHO 세포의 수분과 글리세린 투과성을 측정하였다. 연구 결과, 해당 CHO 세포가 발현한 PIP1.3의 물 분자 수송 능력은 낮은 편이지만 글리세린을 선택적으로 수송할 수 있었다. |
