| 저자(한글) |
XUE, Xianghong,ZHENG, Xuexing,GAI, Weiwei,LIANG, Hongru,MA, Jinzhu,LI, Ling,WANG, Tiecheng,FENG, Na,HUANG, Geng,ZHAO, Yongkun,YANG, Songtao,XIA, Xianzhu |
| 초록 |
[목적] 광견병 바이러스(rabies virus) CVS-11주의 전체 게놈 서열을 측정하고, CVS-11주의 전체 cDNA 감염성 클론을 구축하였다. [기법] RT-PCR로 CVS-11주의 전체 게놈을 증폭하여 중복된 12개의 조각을 얻은 후, 모두 pEASY-Blunt 벡터에 복제하여 CVS-11주 전체 게놈 뉴클레오시드(nucleoside) 서열을 측정하였다. DNAMAN 소프트웨어를 이용하여 CVS-11 전체 서열의 단일성 효소 소화 사이트를 분석하고 프라이머를 설계한 후, 4개 단락으로 나누어 CVS-11 전체 게놈을 증폭하였다. 증폭한 산물은 다단계 효소 소화(Multi-step enzyme digestion)를 거쳐 점차적으로 원핵 발현 벡터 pcDNA3.1에 진입하였으며, 전체 길이 플라스미드 pcDNA3.1-CVS-11을 얻었다. pcDNA3.1-CVS-11와 그 보조 플라스미드 pcDNA3.1-N, P, L, G는 NA 세포를 동시 전이(cotransfection)시켰으며, 면역 형광 염색법과 RT-PCR 검증을 거쳐 재조합 바이러스 rCVS-11을 얻었다. [결과] CVS-11 전체 게놈 서열은 11,927개의 뉴클레오시드로 이루어졌고, 5개의 구조 단백질(structure proteins)을 코딩하였으며, 그 구조 유전자 배열은 기타 광견병 바이러스와 같았다. 또 CVS-11 전체 길이 cDNA 재조합 플라스미드 pcDNA3.1-CVS-11과 그 보조 플라스미드 pcDNA3.1-N, P, L, G를 성공적으로 구축하였다. 동시 전이를 거쳐 재조합 바이러스 rCVS-11을 성공적으로 얻었다. [결론] CVS-11주 감염성 클론의 구축은 분자 수준에서 광견병 바이러스를 연구하는 새로운 기초를 마련하였다. |
