| 초록 |
혈장 가운데서 함량이 가장 풍부한 단백질로 인간 혈청 알부민(human serum albumin, HSA)은 혈액 내의 기능성 단백질, 지방산, 호르몬, 약물 등을 제어하는 한편 혈액 삼투압을 유지하는 기능이 있다. 피치아효모 공정균 Pichia pastoris GSll5/pPIC9K-rHSA을 50L 발효관에서 발효하고 그 발효액을 냉동 및 원심 분리하여 상층액을 초여과 농축하였다. 그리고 Blue Sepharose 6FF 친화성 크로마토그래피, Phenyl Sepharose 6FF 소수성 크로마토그래피와 SP Sepharose 6FF 이온 크로마토그래피 등 정제 과정을 통해 rHSA의 규모화 제조를 구현하였다. 최종적으로 rHSA의 순도가 99.9% 이상에 달했다. rHSA의 결정 조건에 대한 선별 실험을 통해 침전제(Precipitant)가 각각 PEG 1,500, PEG 3,350, PEG 6,000, MPEG 2,000와 MPEG 5,000인 5종 결정 조건을 선별하고 결정 환경이 모두 소수성 환경이며, 결정 환경에 DTT와 유사한 강한 환원제가 섞여 있으면 안된다는 것으로 확인되었다. 그중 MPEG 2000 침전제 조건으로 최적화한 rHSA와 pHSA 단백질 결정체를 X선 회절법(X ray diffraction)으로 분석하였을 때, 그 분별율이 가장 양호하여 각각 3.4 ? 3.1 ?인 것으로 확인되었다. 분자치환법을 통해 구조가 거의 비슷한 rHSA, pHSA 결정체 구조를 얻었다. 해당 연구는 rHSA의 임상 응용과 HSA 융합 단백질(fusion protein)의 결정체 구조 연구에 신뢰성 근거와 기초를 제공한다. |
