| 초록 |
염소 이온 통로는 분포가 광범위한 음이온 선택성 통로 패밀리 단백질이며, 세포 용적 유지, 세포질 내 pH 조절, 단백질 수송, 세포 이동, 증식 및 분화 등 중요한 생리 과정에서 다양한 역할을 한다. 그러나 현재 이 기능 조절에 관한 연구는 비교적 적다. 본 연구에서는 전압 개폐 염소 이온 통로 CLH-1이 융합된 녹색 형광 단백질(CLH-1::GFP)을 발현시킨 유전자 변형 선충을 구축하였다. CLH-1::GFP는 주로 선충의 머리 뉴런 및 신체 후장 세포 내에 발현시켰다. 최근에 개발된 GFP 포획용 GFP-Trap 기술을 이용하여, 유전자 변형 선충의 용해물 내에서 염소 이온 통로 CLH-1 기능을 조절할 수 있는 상호 작용 단백질을 포획하였다. 질량 스펙트럼 분석 결과, 모두 27개의 단백질과 CLH-1::GFP이 동시에 포획되었다. 생화학 실험 결과, 그중 원핵생물 신장인자(EEF-1)는 CLH-1 단백질과 직접 상호 작용하였으며 또한 EEF-1과 동시 발현된 상황에서 CLH-1의 단백질 수준은 뚜렷이 증가하였다. 결론적으로, 선충에 발현시킨 CLH-1::GFP를 이용하고 GFP-Trap 및 질량 스펙트럼 분석 기술을 결합하여 전압 개폐 염소 이온 통로와 상호 작용하는 단백질 식별이 가능하였다. 동시에 EEF-1은 선충의 CLH-1 통로 기능 조절이 가능하였다. |
