| 초록 |
박테리오파지(bacteriophage)의 C말단표시계통(C-terminal display mechanism)을 이용하여 구축한 cDNA 라이브러리는 개방형 해독틀(open reading frame, ORF) 선별 메커니즘이 결핍하며, 또한 라이브러리 중 대부분 박테리오파지 클론 디스플레이 프레임(display frame)의 외부는 비천연 짧은 펩티드(unnatural short peptide)이다. 그러므로 후속 단백질의 선별에 불편을 가져왔다. 박테리오파지의 ORF 선별기능을 실현하기 위해 PCR기술을 이용하여 기존의 벡터 T7Select10-3b를 개질하였다. 그리고 다클론 위치(multiple cloning site, MCS) 중 외래 cDNA 삽입 위치 3 rsquo; 말단에 6×히스티틴 선별 태그(6×His-tag)를 삽입하여 포장(packaged) 후 발현되는 단클론 항체(monoclonal antibody)를 선택하여 폐암 cDNA 라이브러리를 구축하였다. 니켈 친화성 크로마토그래피(Ni-chelating affinity chromatography)로 정제 후, 라이브러리에서 히스티틴을 발현시키는 클론체를 수집하였다. 그리고 화학발광면역실험(chemiluminescence immunoassay)을 이용하여 선별효과를 검사하였다. 연구 결과, 개질된 새로운 벡터는 히스티틴 태그를 발현시킬 수 있었으며, 또한 구축한 폐암 cDNA 라이브러리에서 선별을 한 후 ORF에 삽입된 클론체의 발현은 선별 전의 6%에서 70%로 향상되었다. 본 연구는 cDNA 라이브러리의 품질 향상을 위해 간단하고 실현가능한 방법을 제공하였다. |
