| 저자(한글) |
GUO, Xiang-ling,WANG, Chen,LI, Xiao-kang,WU, Ting-cai,LI, De-yuan,CHEN, Po-yan |
| 초록 |
【목적】파브리시우스낭(bursa of Fabricius)의 활성 펜타펩티드(pentapeptide)인 BP5(bursopentin)는 다기능 생물학적 활성인자로서, 면역 조절과 항산화 기능을 갖고 있을 뿐만 아니라 항종양 활성도 갖고 있다. BP5의 항종양 생물 기능과 관련되는 작용 메커니즘은 아직 잘 알려지지 않았다. 【방법】본 연구는 T7파지 디스플레이(Phage display) 기술을 이용하여 닭 DT40 세포의 T7 파지 cDNA 라이브러리를 구축하였으며, BP5-BSA를 표적 분자로, 라이브러리의 친화성을 패닝(panning)하였으며, 서열 측정과 생물정보학적 분석을 통하여, BP5의 결합 단백질을 얻었다. BP5로 유도한 닭 DT40세포의 mRNA 유전자 발현 프로파일을 분석하고 BP5가 HCT116세포 중의 p53 루시페라아제(luciferase) 활성과 P53 신호 경로 중의 관련 단백질의 발현에 미치는 영향을 분석함으로써 BP5의 항종양 작용 메커니즘을 연구하였다. 【결과】구축한 닭 DT40세포의 T7파지 cDNA 라이브러리의 초기 적정 농도는 1.2×10 4 pfu/mL, 재조합률은 91.7%였으며, 증폭 후의 적정 농도는 1.9×10 9 pfu/mL였다. 바이오패닝(biopanning)을 통하여, BP5와 결합된 3개의 닭 유래 단백질 혈관내피 생장인자A(vascular endothelial growth factor A), 사이클린E1(cyclin E1)과 수송 단백질 입자 복합체2(trafficking protein particle complex 2)를 얻었다. 유전자 발현 프로파일을 분석한 결과, BP5는 몇 개의 항종양 기능과 관련되는 경로를 조절하는데 참여하였는데, 그 중에는 P53 신호 경로가 포함되었으며, 또 p53 신호 경로와 관련되는 5개 차등 발현 유전자도 모두 세포 주기 조절 혹은 항종양과 연관이 있었는데, 그 중 SIAH1, TP53(p53), CIP1(p21) 유전자는 상향조절되고 CHEK2, CCNE1 유전자는 하향조절되었다. RT-PCR기법으로 10개 발현 수준에 뚜렷한 변화가 발생한 10개 차등 유전자를 검출할 수 있었는데, 그 결과는 유전자 칩 분석 결과와 일치하였다. BP5가 p53 루시페라아제의 활성에 미치는 영향에 대한 실험을 진행한 결과, BP5는 0.2-20 μg/mL 농도 조건에서 HCT116세포 중 p53의 상대 루시페라아활성을 뚜렷하게 향상시켰다. Western blotting 결과는 BP5가 p53, p21단백질의 발현 수준을 뚜렷하게 촉진하나 CCNE1과 CHEK2단백질의 발현 수준은 뚜렷하게 저하시킨다는 것을 입증하였다. 【결론】본 연구 결과는 BP5가 p53 신호 경로를 통하여 그 항종양 생물학적 기능을 수행한다는 것을 설명하였으며, BP5의 구체적인 항종양 분자 메커니즘을 한층 더 연구하는데 참고적 근거를 제공하였다. |
