| 저자(한글) |
LU, Xue-ying,LI, Jie-qiong,ZHUANG, Shu-zhen,LIU, Xiao-ning,MA, Ji |
| 초록 |
목적: 키티나아제(chitinase)는 곤충이 불리한 환경에 처했을 때 자신을 보호하는 중요한 방어 물질이다. 본 연구는 DNA-단백질 통합 면역 책략을 통하여 황막 곤충인 Microdera punctipennis의 키티나아제(MpCHI786) 항혈청(antiserum preparation)을 제조하여 불리한 환경속에서 키티나아제의 변화를 검측하였다. 방법: 작은 Microdera punctipennis 성충 체내에서 총 RNA를 추출하여 역전사 한후, RT-PCR로 Mpchi786 cDNA를 증폭하였다. 그리고 원핵 발현 벡터 pET30a-Mpchi786을 구축하고 대장간균 BL21 내에서 IPTG로 유도 발현시켜 융합 단백질 His-MpCHI786을 얻었다. 융합 단백질의 겔을 회수하여 정제한 후, 프로인트 항원보강제와 혼합하여 항원으로 사용하였다. 이밖에 진핵 발현 플라스미드 pcDNA3.0-Mpchi786을 구축하고 마우스 꼬리정맥에 큰 압력으로 주사한 후 8시간 지나서 RT-PCR로 간장 내의 일시적 발현을 검측하였다. pcDNA3.0-Mpchi786 근육 주사법으로 마우스를 3번 면역시킨 후, His-MpCHI786 융합 단백질을 이용하여 2번 더 면역시켰다. DNA 면역과 면역 과정이 끝난 후, 면역 마우스의 혈청을 수집하고 ELISA와 Western blot 기법으로 항혈청 역가와 특이성을 검측하였다. 결과: RT-PCR 결과, 큰 압력으로 꼬리정맥에 주사하여 8시간 지난 후, pcDNA3.0-Mpchi786 플라스미드가 마우스의 간장에서 특이적으로 발현되었다. Westernblot 검측 결과, His-MpCHI786 융합 단백질을 항원으로 사용한 pcDNA3.0-Mpchi786DNA 플라스미드로 3번 면역시킨 항혈청과 His-MpCHI786 융합단백질로 면역을 2번 강화한 항혈청에 모두 특이성 반응 밴드가 나타났다. ELISA 검측 결과, 항혈청 역가가 1:204,800 이상이었다. 결론: DNA-단백질 통합 면역법을 이용하여 역가가 높고, 특이성이 있는 Microdera punctipennis의 키티나아제 MpCHI786 항혈청을 얻을 수 있다. |
