| 저자(한글) |
LAN, Jin-ping,WU, Peng-cheng,GUO, Mei-cen,SHI, Jia-nan,WEI, Han-fu,RONG, Rui-juan,HAO, Yu-jie,YANG, Shuo,BAI, Ying-ying,LI, Li-yun,WU, Lin,LIU, Si-qi,YIN, Chang-cheng,LIU, Guo-zhen |
| 초록 |
nptⅡ 인코딩 네오마이신 인산전달효소(neomycin phosphotransferase)는 형질전환 실험에서 가장 일반적으로 사용되는 선별 표기용 유전자 중 하나이다. 본 연구는 재조합 NPTⅡ 단백질을 발현시켰고 단일 클론 항체를 제조하였다. 또한 웨스턴 블롯 방법으로 형질전환 벼의 NPTⅡ 단백질을 검사하는 방법을 설립하였다. 그리고 유전적 특성, 발현의 시공간적 특성, 발현 풍도, 세포내 위치확인 등을 포함한 NPTⅡ 단백질의 발현 특성을 분석하였다. 연구 결과, 앞서 설립한 방법으로 벼 한알의 0.25%(약 0.025 mg) 샘플에서 NPTⅡ 단백질을 검사할 수 있었다. NPTⅡ의 발현은 우성유전의 법칙에 부합하였다. 또한 NPTⅡ 발현을 근거로 형질전환 T1세대 종자에 대한 양성, 음성 감별과 동형계통(homozygous lines)의 감별을 수행할 수 있다. 그리고 T1세대 유묘의 NPTⅡ 풍도 분석은 동형 벼 감별에 참고정보를 제공하였다. 정량 분석 결과, 유묘기 잎의 NPTⅡ 단백질 함량은 생중량의 약 0.08‰였다. CaMV-35S 프로모터의 구동 하에 벼 유묘기, 성숙기의 잎과 뿌리 조직에서 NPTⅡ 단백질의 발현량은 높게 나타났다. 하지만 분얼기와 수잉기(booting stage)에서 낮게 발현하였다. NPTⅡ은 서로 다른 시기의 뿌리, 줄기, 잎, 이삭, 꽃, 종자 등 조직에서 모두 발현하였다. 다만 분얼마디, 줄기마디, 수축(panicle axis), 꽃밥 등 조직에서의 발현량은 상대적으로 낮았다. 이 외, NPTⅡ 단백질의 발현은 주로 세포질에만 국한되었다. 종합해보면 본 연구는 응용가치가 있는 NPTⅡ 단백질 검사용 웨스턴 블롯 방법을 설립하였고 벼에서 NPTⅡ 단백질의 발현 특성을 체계적으로 분석하였다. |
