| 저자(한글) |
WANG, Xue-ying,ZHAO, Xiao-fei,LI, Yong-xin,ZHU, Hui,MA, Zheng-hai |
| 초록 |
항암바이러스(oncolytic virus)와 바이러스 벡터로 1형 단순포진 바이러스(herpes simplex virus type 1, HSV-1)의 사용 연구는 이미 긴 시간 동안 수행되었다. 본 연구에서는 세균 인공 염색체(bacterial artificial chromosome) 기술을 이용하여 HSV一1 벡터 시스템을 구축하였다. 먼저, HSV-1 내부 역위 반복 배열(internal inverted repeat sequences, IR) 양측의 단편을 pK05에 복제하여 왕복 플라스미드 pK05/BN을 얻었다. pHSV-BAC을 함유한 대장간균에 그를 형질전환한 후 선별을 통해 IR 영역의 DNA를 삭제한 pHSV △ IR-BAC를 얻었다. pHSV △ IR-BAC로 Vero 세포를 형질전환하여 IR 영역을 삭제한 재조합 바이러스 HSV △ IR(MH1001)를 얻었다. 상술한 pK05/BN과 pHSV △ IR-BAC를 함유한 대장간균으로 HSV一1 벡터 시스템을 구축하였다. 해당 시스템을 이용하여 녹색 형광 단백질 EGFP을 발현할 수 있는 재조합 바이러스 HSV △ IR/EGFP(MH1002)를 얻었다. 감염된 Vero세포에서 MH1001과 MH1002의 증식 수준이 야생형 HSV-1에서보다 조금 낮았지만 그 차이가 유의수준에 도달하지 않았다; 웨스턴 블롯 검사 결과, 감염 세포 가운데서 재조합 바이러스 조기 단백질 ICP0, ICP4, ICP8, ICP22, ICP27 등의 발현 수준이 감소하였다; 면역 형광 및 레이저 공초점 검사 결과, 재조합 바이러스와 야생형 바이러스가 모두 세포질에 존재하고 있는 것을 확인하였다. 상술한 결과로부터 IR 영역을 삭제한 재조합 HSV-1의 복제 능력이 여전히 보존되었기 때문에, 그를 이용해 외인성 유전자를 발현할 수 있다는 것을 알 수 있다. 따라서 구축한 HSV-1 벡터 시스템을 외인성 유전자를 함유한 복제형 재조합 HSV-1의 구축에 사용할 수 있다. |
