| 저자(한글) |
LIANG, Xiu-yi,LIANG, Zhi-cheng,LIU, Wen-li,HE, Jie-ning,ZHANG, Zhi,TIAN, Sheng-li |
| 초록 |
[목적] 효모 클루이베로마이세스 락티스(yeast Kluyveromyceslactis) 발현 벡터 pKLAC2를 기반으로 하는 발현형 T-벡터(expression T-vector)를 구축한다. [방법] 위치지정 돌연변이 기술(site-directed mutation)을 이용하여 벡터 pKLAC2의 Xcm I 사이트를 돌연변이시킨 후, 발현 벡터 pKL-MUT를 얻었다. PCR 기법으로 황색 형광 단백질 유전자를 포함한 XcmⅠ 카세트를 증폭하였으며, EcoRⅠ와 XhoⅠ 사이트를 통하여 발현 백터 pKL-MUT까지 연결시켜 재조합 벡터 pKL-YFP를 구축하고, 제한효소 XcmⅠ 효소 소화 후 T 벡터 pKL-T를 생성하였다. 연결된 융합 유전자 14-3-3-Zs G를 효모 클루이베로마이세스 락티스 GG799로 전환하였다. [결과] 해당 T 벡터를 이용하여 외인성 유전자 14-3-3-Zs G를 성공적으로 구축할 수 있으며, 효모 클루이베로마이세스 락티스에서 14-3-3-Zs G 단백질을 발현하였다. 또 형광법과 Western blotting으로 정확하게 검증하였다. [결론] 효모 클루이베로마이세스 락티스 발현형 T 벡터를 성공적으로 구축하였으며, 이는 효과적으로 분비 발현하는 외인성 유전자를 신속하게 클로닝할 수 있는 특징을 갖고 있고, 효모 클루이베로마이세스 락티스 발현 시스템의 관련 단백질 발현의 산업화를 추진하는데 실제적 의미를 갖고 있다. |
