| 초록 |
아데노바이러스 벡터는 유전자 치료를 위한 전망 있는 벡터 중의 하나이다. 새로운 아데노바이러스의 규모화 생산 공정을 얻기 위해, 본 연구에서는 5L의 진탕 충격파식 디스포저블 바이오리액터(disposable bioreactor) 현탁 배양법을 이용하여 HEK293 세포로 재조합 아데노바이러스(adenovirus vectors) 벡터를 생산하였다. 세포는 종자 사슬의 점차적인 증폭을 통하여 AP10 바이오액터에 접종시켰다. 그리고 CD293 무혈청액터를 이용한 유가식 배양법으로 현탁 HEK293 세포를 배양한 결과, 세포 밀도가 약 2.0×10 6 개/mL에 달했을 때, 30개의 다중감염원(Multiplicity of infection, MOI)으로 재조합한 Ad-IFNγ(Recombinant adenovirus-interferon gamma)을 감염시키면, 48시간 후에 세포를 얻을 수 있다. 3차례의 동결 해동 원심법을 사용하여 상층 바이러스의 조제품을 얻었다. 외피 단백질(capsid protein) 면역법을 사용하여 조제품의 적정 농도를 신속하게 측정하였다. 실험 결과, 진탕 충격파식 디스포저블 바이오리액터를 이용한 유가식 배양법으로 HEK293 세포를 6일 동안 현탁 배양한 결과, 밀도가 2.0×10 6 개/mL, Ad-IFNγ 조제품 산량이 1.49×10 13 IFU(Infectious unit), 단일 세포의 포장량이 3,800 IFU/cell에 달했다. 음이온 교환크로마토그래피법을 사용하여 재조합 아데노바이러스를 정제하였는데, 회수율이 35.9%이었다. 5L 충격파식 디스포저블 바이오리액터를 이용한 현탁배양의 HEK293 세포를 사용하여, 재조합 아데노바이러스벡터 Ad-IFNγ에 대한 초보적인 공정을 구축하였다. |
