| 초록 |
박대(Cynoglossus semilaevis)의 유전체 및 전사체에 대한 시퀀싱을 통하여, 박대의 성관련 유전자 CSFR2를 예측하였으며, 해당 유전자를 클로닝하고 발현을 분석하였다. CSFR2 유전자의 기능을 심층적으로 연구하고자, 본 연구는 단백질 측면으로부터 원핵 발현 벡터 pET-32a-CSFR2를 구축한 후, 대장균(Escherichia coli)에 형질주입하여 발현을 유도하고, His Trap을 이용하여 단백질을 정제하였다. SDS-PAGE 전기영동 검출을 통하여 생성물을 유도하고 정제하였으며, 정제한 CSFR2 단백질을 1령 박대 정소(testis)에 주입하여 발현시켰다. CSFR2가 하나의 성관련 유전자에 속하기에 면역 반응을 통하여 단백질의 활성을 직접 검출할 수 없다. 본 연구는 다양한 시간대에 샘플을 수집하여 박대의 기타 성관련 유전자 Cyp19a과 Foxl2의 발현량 변화를 검출함으로써, CSFR2 단백질의 활성 및 기능을 간접적으로 반영하였다. 실험 결과, 재조합 단백질은 생체 세포 내에 진입하여 일정한 역할을 하였으며, 6~72시간 내 성관련 유전자 Cyp19a과 Foxl2의 발현을 상향 조절하였는데, 이는 CSFR2 단백질이 생물적 활성을 갖고 있고, 기타 성관련 유전자의 발현량을 조절할 수 있으며, 안드로겐(androgen)이 에스트로겐(estrogen)으로 전화되는 것을 간접적으로 촉진한다는 것을 설명한다. 본 연구를 통하여 CSFR2 유전자가 박대의 성결정과 분화에서 일으키는 작용을 한층 더 이해하였다. 또한 본 연구는 박대의 성조절을 위하여 이론적 근거를 제공하였으며, 인공 유도 어류의 성전환 측면에서 중요한 응용 가치를 가진다. 이 외, 본 연구는 단백질의 활성을 검증하는데 새로운 기법을 제공하였다. |
