| 저자(한글) |
LIANG, Xiu-yi,LIANG, Zhi-cheng,ZHU, Xiao,LIU, Shi-yu,ZHANG, Zhi,TIAN, Sheng-li |
| 초록 |
PCR 산물에 대해 직접적으로 복제하고 또 효모 표면에서 발현될 수 있는 새로운 T 벡터를 구축한다. 효모 표면 발현 벡터 p YD1의 다중 클론 사이트 서열에 근거하여, 두 끝에 XcmⅠ 내접효소의 효소 절단 사이트를 이용하고 황색 형광 단백질 유전자를 함유한 XcmⅠ 카세트를 설계하였으며, NheⅠ와 XhoⅠ 효소절단 사이트를 p YD1 벡터에 삽입한 후 플라스미드 p YD-YFP를 형성하여 효소절단 감정과 DNA 시퀀싱 분석을 진행하였고, 다시 XcmⅠ 효소 절단을 거친 후 두 끝에 d T가 있는 표면 발현 T 벡터를 형성하였다. PCR로 형광 단백질을 함유한 2개 융합단백질 PCAD-CFP와 PSR-Ds Red의 유전자를 증폭하였으며, 구축한 T 벡터에 직접 복제하여 그 발현 기능을 검출하였다. 효소 절단 감정과 DNA 시퀀싱 결과, PCAD-CFP와 PSR-Ds Red를 정확하게 벡터에 삽입시키고 각각 맥주효모균(Saccharomyces cerevisiae) EBY100으로 전환시켰으며, 레이저 공초점 현미경으로 상응한 형광 효모를 관찰하였다. 결과적으로 복제된 융합단백질 유전자 조각의 벡터는 효모 세포에서 성공적으로 표면 발현할 수 있었는데 이는 구축한 효모 표면 발현 T 벡터가 목적 단백질을 직접 복제하고 또 표면 발현시키는 기능을 갖고 있다는 것을 증명한다. |
