| 초록 |
본 연구는 붉바리 신경괴사 바이러스(Red-spotted grouper nervous necrosis virus, RGNNV)의 RNA2 서열을 기반으로, 3'말단에 역전사 프라이머를 설계하고 5'말단에 PCR 증폭 프라이머를 설계하여, RNA 사슬의 상대 완전성을 평가할 수 있는 RT-PCR기법을 구축한 후, LR RT-PCR(Left reverse transcript Right amplify RT-PCR)으로 명명하였으며, 해당 기법의 프라이머 농도, Mg 2+ 농도, dNTPs 농도, 어닐링(annealing) 온도 등 4개 중요한 파라미터를 최적화하였다. 연구 결과, 최적화 된 LR RT-PCR 반응 시스템 환경은 프라이머 농도 0.2 μmol/L, Mg 2+ 농도 4 mmol/L, dNTPs 농도 0.5 nmol, 어닐링 온도 60℃였다. 본 연구에서 구축한 LR RT-PCR기법은 민감도가 높아 1 pg의 RGNNV RNA2 표준 제품을 검출할 수 있었다. 해당 기법은 또 특이성이 강하여 RSIV 등 어류의 일반 바이러스, 비브리오 앵길라룸(Vibrio anguillarum) 등 일반 수산 병원균 및 그루퍼(Grouper) RNA과 모두 교차반응을 하지 않았다. 구축한 LR RT-PCR기법을 이용하여 오존에 의한 RGNNV RNA2 파괴 효과를 평가한 결과, 오존 농도가 0.3 mg/L에서 차례로 0.5, 1.0, 2.0 mg/L로 증가하였을 때, LR RT-PCR의 증폭 산물은 없어질 때까지 감소하였다. 연구 결과, 구축한 LR RT-PCR기법은 신속하고 정확하게, 오존에 의한 RGNNV RNA2 파괴 효과를 평가할 수 있어 양식장의 오존에 의한 RGNNV 소독 효과를 평가하는데 적용할 수 있었으며, RGNNV를 검출하고 모니터링할 수 있었다. |
