| 저자(한글) |
LI, Li-zhen,YANG, Jian,TIAN, Xin-peng,MAI, Zhi-mao,SU, Hong-fei,LONG, Li-juan,ZHANG, Si |
| 초록 |
본 논문에서는 심해 방선균 Streptomyces sp. SCSIO 03032 게놈에서부터 한가닥의 전분 결합역(starch-binding domain)을 가진 글리코시드 가수분해효소 패밀리 13의 유전자 amy032를 증폭하여 확보하였다. 해당 유전자에 암호화된 아미노산은 이미 알고 있는 단백질과 67%의 일치성을 보였다. 또한 amy032를 발현 벡터 pET32a 프로모터 하류에 삽입함으로써 재조합 벡터 pET-amy를 구축하였다. 그리고 재조합 플라스미드를 대장균 Rosseta(DE3) 균주 체내에 형질주입한 후 SDS-PAGE로 확인한 결과, 표적 유전자는 균주 체내에 성공적으로 발현되었다. 그 외, 니켈-친화성 크로마토그래피(nickel-affinity chromatography, Ni-NTA)를 통하여 재조합 효소를 정제하였으며 또한 그 효소학적 성질을 묘사하였다. 그 결과 아밀라아제 AMY032의 재조합에 가장 적합한 온도는 50℃였고 가장 적합한 pH는 8.0이었다. 가용성 전분을 기질로 할 경우 해당 효소의 비활성은 (276±57)U/mg이었고 K m 는 0.02g/L였으며 V max 는 70 mg/(L·min)였다. Ca 2+ 은 해당 효소의 촉매 활성을 향상시킬 수 있었지만 Ni 2+ , Cu 2+ , Zn 2+ 및 Mn 2+ 등은 해당 효소에 억제 작용이 있었다. AMY032는 생옥수수 전분 및 생쌀 전분에 가수분해 활성이 있었고 그 비활성은 각각 (49±12)U/mg 및 (39±11)U/mg이었다. 주사전자현미경으로 확인한 결과, AMY032는 생옥수수 전분의 표면에 뚜렷한 훼손(dents) 흔적을 남겼다. |
