| 저자(한글) |
LI, Hong-mei,JIANG, Xiao,LIU, Zhu-hong,ZHAO, Zhe,REN, Chun-hua,HU, Chao-qun,SHI, Lei,WANG, Guang-jun |
| 초록 |
본 연구는 ESE-Quant tube scanner 검사 플랫폼을 이용하여 고리매개 등온증폭 기술(Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP) 기반의 실시간 형광 검사 방법을 구축하여 흰점바이러스(White Spot Syndrome Virus, WSSV) 검출 과정에 사용하였으며, 또한 네스티드 PCR(nested PCR), 실시간 PCR(Real-time PCR) 및 기타 이미 보고한 4종 LAMP 방법의 검출 민감도(sensitivity), 실용성을 비교하였다 연구 결과, 구축한 실시간 형광 LAMP 검사 방법으로 63℃ 항온(homeothermy), 30분 반응하는 조건에서 최저로 10 5 배 희석한 유전체 DNA 템플릿을 검출할 수 있었는데 이것은 Real-time PCR 검사 방법의 민감도에 도달하였고, 네스티드 PCR과 기타 이미 보고한 4종 LAMP 방법의 검출 민감도에 비하여 높았으며, 또한 특이성이 비교적 좋았고, 전염성피하 및 조혈기괴사증 바이러스(infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus, IHHNV) 등 5종 일반적인 새우 병원성 DNA와 교차 반응이 없었다. 구축한 플라스미드를 이용하여 민감도 실험을 한층 더 진행한 결과, 본 연구에서 구축한 실시간 형광 LAMP 검사 방법의 최저 검출 한계는 24개 복제 플라스미드 DNA에 도달하였고, 검출 시간은 30분이었다. 66건의 샘플을 검사한 결과, 실시간 형광 LAMP 검사 방법으로 검출한 양성률 7.57%, 정확율 100%에 도달하였는데 이것은 기타 WSSV 검출 방법에 비하여 우수하였다. 연구 결과, 본 연구에서 구축한 LAMP 검사 방법으로 WSSV를 검출하는 방법은 조작이 간단하고, 반응 속도가 빠르고, 특이성이 좋고, 민감도가 높고, 원가가 낮으며, 직관적이고도 실시간으로 반응 진행 현황을 관찰할 수 있으므로 새우 양식장 및 진단 실험실에서 WSSV를 신속하게 검출하는 과정에 적합하였다. |
