| 저자(한글) |
Xin, Shengnan,Zhang, Kexing,Zhang, Mingyue,Han, Zongxi,Shao, Yuhao,Liu, Xiaoli,Liu, Shengwang,Ma, Deying |
| 초록 |
본 논문은 비둘기(pigeon) 골수와 간 조직에서 증폭된 2개의 AvBD 유전자를 대장균 속에서 발현시켜 얻은 재조합 단백질의 항균활성(antimicrobial activity)을 분석하였다. RT-PCR 기법으로 비둘기 골수와 간 조직에서 AvBD5 유전자를 증폭하였고 기존에 발견한 AvBD와 일부 포유 동물의 beta;-디펜신-5( beta;-defensin 5)의 아미노산 서열로 계통수를 구축하였다. 본 유전자를 대장균 원핵 발현 벡터 pGEX-6p-1에 클로닝하여 원핵 발현시킨 후 재조합 단백질을 정제하였고 체외 항균 활성 및 물리화학적 특성을 분석하였다. 분석 결과, 2개 유전자의 cDNA 크기는 모두 201bp이었고 66개 아미노산 잔기가 코딩되었고 6개 보존적 시스테인 잔기를 포함하고 있었다. 계통발생분석 결과, 본 유전자가 유도한 두 가지 아미노산 서열과 오리 AvBD5의 유사성이 가장 높았으며 각각 87.9%와 78.8%이었고 두 가지 아미노산 서열의 유사성은 83.3%이었다. 그러므로 이를 비둘기 vBD5 alpha;(골수)와 비둘기 AvBD5 beta;(간)으로 명명하였다. 다음으로 두 가지 아미노산을 각각 대장균 pGEX-6p-1에 서브 클로닝하여 원핵세포 내에서 발현시켰다. 두 가지 재조합 융합 단백질은 정제된 후 집락계산법으로 체외 항균활성, 염이온 농도가 항균활성에 미치는 영향 및 용해 단백질의 용혈활성을 분석하였다. 결과, 재조합 비둘기AvBD 5 alpha;、AvBD 5 beta; 융합 단백질의 분자량은 모두32 kDa이었고 항균활성이 뚜렸하였다. 12가지 세균에 억제작용을 하였고 높은 염도는 항균 활성에 영향을 주었다. 또한, 이 두 재조합 단백질은 적세포에 대한 뚜렷한 용혈활성이 없었다. |
