| 저자(한글) |
GUO, Jia,YIN, Yan-xin,JIANG, Ming,YU, Li-hua,JIANG, Yun,LI, Gui-qing,FANG, Jian-min |
| 초록 |
본 연구에서는 간세포증식인자 수용체(C-Met) 세포 외 영역 유전자를 함유한 렌티바이러스 발현 벡터를 구축하고 이를 293T 세포에 형질 감염시켰으며, 진핵발현 및 정화하여 인간 C-Met 세포 외 구간 단백질을 얻었다. RT-PCR로 인간 C-Met 세포 외 영역(ED) 유전자를 증폭하여 렌티바이러스 발현 벡터 pRRL-CMV-ED를 구축하였으며, 인산칼슘법으로 293T 세포를 형질감염시켰고, RT-PCR 및 Western blot법으로 293T 세포에서 ED 유전자의 mRNA 전사와 단백질 발현을 검출하였다. PCR 증폭 및 시퀀싱 결과, pRRL-CMV-ED 렌티바이러스 발현 벡터를 성공적으로 구축하였으며, PCR로 증폭한 목적 유전자 크기는 약 2,700 bp이었다. pRRL-CMV-ED를 형질감염시킨 293T 세포 상청액에 대해 니켈 컬럼 친화 및 정화를 거친 후, SDS-PAGE로 분석한 결과, 105 kD의 정화 산물에 뚜렷한 단백질 밴드가 있었다. Western 및 ELISA 결과, 정화 단백질은 C-Met 세포 외 영역 단백질이며 간세포 성장인자(HGF)와 특이적으로 결합할 수 있었다. 본 연구 결과는 C-Met 단클론항체를 제조하고 HGF/C-Met 신호 경로를 차단하는 중화 항체를 선별하는데 기초를 마련하였다. |
