| 저자(한글) |
ZHAO, Ming,HE, Zhong-jie,WANG, Rui,YAO, Ming-dong,SHI, Hui,WANG, Zhen-wei,MENG, Yao |
| 초록 |
본 논문에서는 효율성이 높고 원가가 낮은 재조합 우리카아제(recombinant uricase) 생산 기술의 공정 노선을 구축하기 위해, PET-Urate Oxidase 발현 플라스미드를 함유한 재조합 E. coli JM109(DE3) 균주의 대규모 발효 배양을 수행하였다. 냉동 보존한 공정균을 1% 질량 분율의 한천을 함유한 종자 배양기에서 배양하고, 횡선을 그은 평판에서 단일 균락을 선별하여 진탕 플라스크에 접종한 후 계속 배양하였다. 마지막으로 5% 체적 분율의 접종량으로 발효 배양기에 접종하고 생장 곡선을 그렸다; 젖당(lactose)을 유도제로 하는 유도법과 전통적인 IPTG 유도법을 이용하여 발효 배양 효과를 비교하였다; 또한 고압 균질기(Homogeneous machine)를 이용한 균체 파괴, 40%~60% 질량 분율의 황산암모늄을 이용한 분급 침전, Q-Sepharose F.F. 크로마토그래피를 이용한 분리 정제 과정을 수행하였다. 실험 결과, 젖당을 유도제로 하고 300 L 발효관 내 배양을 통해 2,700 g 습윤 상태 질량의 균체를 얻을 수 있으며, 표적 단백질의 발현량이 균체 가용성 단백질의 약 30%로써 IPTG 유도 효과보다 양호했다; 분리 정제 후 해당 효소의 정제 배수가 기존의 4.5배이고 활성 회수율이 40%에 달했다; 정제한 재조합 우리카아제에 대한 SDS-PAGE와 HPLC 분석을 통해, 단일 단백질의 색소대와 단일 세탁의 피크 발생을 확인할 수 있었다. 해당 성과는 의학 분야에서 재조합 우리카아제의 실제 응용에 이론적 실험 기초를 마련하였다. |
