| 초록 |
목적 : 큰느타리버섯(Pleurotus eryngii)을 생물반응기(bioreactor)로 하여 레스베라트롤(resveratrol)을 발현시켰다. 방법 : 큰느타리버섯 균주 Pe18과 P811을 소재로 하고, 레스베라트롤의 농도 기울기(concentration gradient)를 설정하여 큰느타리버섯 원형질체(protoplast) 및 균사체(mycelium)가 히그로마이신(hygromycin, HmB)에 대한 민감 농도를 측정하였다. PEG 유도법으로 레스베라트롤 합성효소 유전자(resveratrol synthase, rs)와 하이그로마이신 저항성 유전자(hygromycin phosphotransferase gene, hph)를 큰느타리버섯의 원형질체에 동시 형질전환(co-transformation)시킨 후 히그로마이신 선별(HmB screening) 및 PCR 증폭을 이용하여 형질전환체에 대하여 선별 및 감정을 진행하였다. 결과 : Pe18와 P811 균주의 원형질체가 히그로마이신에 대한 최저 반응 농도는 각각 20 mu;g/mL와 10 mu;g/mL이며, 또한 두 가지 균주의 균사체가 히그로마이신에 대한 반응 농도는 모두 160 mu;g/mL이였다. 그리고 90개의 형질전환체 중 30개의 형질전환체는 두 가지 유전자와 동시에 결합되었다. 결론 : 큰느타리버섯의 서로 다른 균주 원형질체가 히그로마이신에 대한 민감성은 서로 다르지만 서로 다른 균주의 균사체가 히그로마이신에 대한 민감성은 일치하며, 같은 균주의 원형질체와 균사체가 히그로마이신에 대한 민감성은 서로 다르며, rs와 hph 두 가지 유전자가 큰트타리버섯 중 동시 형질전환율은 33%였다. |
