| 초록 |
염증 세포(inflammatory cell)의 유도로 생성된 활성산소(reactive oxygen species, ROS)와 위장 산화 스트레스(intestine oxidative stress)는 만성 염증성 장질환(chronic inflammatory disease) 및 결장암(colorectal cancer)의 발생과 밀접한 관련이 있다. 현재 세포핵 인자 kappa;B(nuclear factor-kappa B, NF- kappa;B)의 신호 경로가 산화 스트레스 반응, 결장 염증과 종양 발생 과정에 대한 작용은 밝혀지지 않았다. 본 연구에서는 화학적 합성 방법으로 한 쌍의 작은 간섭 RNA(small interference RNA, sirNA) 서열, 표적 인간 NF- kappa;B 유전자 길이가 60 bp가 되는 올리고뉴클레오티드 사슬(oligonucleotide chain)을 pSUPER 작은 간섭 RNA 발현 벡터에 클론시킨 후, 단일 효소 절단(single enzyme digestion), 이중 효소 절단(double enzyme digestion) 및 서열 측정을 통하여 재조합 RNA 간섭 벡터를 성공적으로 구축하였음을 입증하였다. 성공적으로 구축된 플라스미드(plasmid)를 결장 상피 세포(colonic epithelial cells) HCT116에 형질전환 시킨 후 p65를 녹다운(knockdown)시켰다. 그리고 웨스턴 블럿법(Western blot)으로 NF- kappa;B p65 단백질의 발현 수준을 검사하였으며, MTT법으로 세포 생존 현황을 검사하였다. 연구 결과, pSUPER-NF- kappa;B p65 벡터는 특이적으로 NF- kappa;B p65 단백질의 발현을 하향 조절 시켰으며, 또한 p65의 발현이 하향 조절되여 과산화수소(hydrogen peroxide, H 2 O 2 )가 유도하는 HCT116내의 활성산소가 증가되었으며, 활성이 있는 세포가 뚜렷하게 감소되었고, 산화적 손상(oxidative damage)이 증가되었다. 연구 결과는 인간 결장 상피 세포 내의 NF- kappa;B p65 경로 억제로 인하여 결장 상피 세포의 산화적 손상이 뚜렷하게 증가된 것을 설명한다. |
