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논문 기본정보
Cloning and expression of Kluyveromyce marxianus gene encoding carbonyl reductase in Escherichia coli
논문 개요
| 기관명 | NDSL |
|---|---|
| 저널명 | 微生物學通報 = Microbiology |
| ISSN | 0253-2654, |
| ISBN |
논문저자 및 소속기관 정보
| 저자(한글) | YING, Guo-qing,YANG, Yue-wei,MEI, Jian-feng,YI, Yu,JIN, Zhi-hua |
|---|---|
| 저자(영문) | |
| 소속기관 | |
| 소속기관(영문) | |
| 출판인 | |
| 간행물 번호 | |
| 발행연도 | 2013-01-01 |
| 초록 | [목적] 카르보닐기 환원효소(Carbonyl reductase) 유전자의 클론, 발현 및 비대칭 생물 촉매 중에서의 응용을 연구한다. [기법] 카르보닐기 환원효소 아미노산 서열에 대해 BLAST를 진행하여 뉴클레오티드(Nucleotide) 서열, 설계 프라이머를 유도하였으며 Kluyveromyce marxianus CGMCC 2.1977 전유전체를 탬플릿으로 PCR 증폭의 목적 조각을 통하여 벡터 pET-28a와 연결시켜 대장간균으로 변환시킨 후 재조합균 BL21(DE3)-(pET28a-cMCR)와 Rosetta(DE3)-(pET28a-cMCR)를 얻었다. [결과] 증폭한 서열은 이미 보고한 mer 서열과 100%의 동원성을 갖고 있었으며 전체 길이는 1,038bp이고 총 345개의 아미노산을 코딩하였다. 목적 단백질은 Rosetta(DE3)-(pET28a-cMCR)에서 고효율 발현을 얻었으며 크기는 42KD이다. 해당 효소의 제일 적합한 반응온도는 40°C이고 최적 반응 pH는 8이며 열안정성과 pH 안정성은 비교적 떨어졌다. Ca 2+ 는 효소활성에 대해 현저한 활성화 작용을 갖고 있었으며 농도가 0.5 mmol/L일 때 효과가 제일 양호하였다. 재조합균은 4-chloro-3-oxobutanoate ethyl ester(COBE)를 (S)-4-chloro-3-hydroxyl butanoate ethyl ester(CHBE)로 환원시킬 수 있으며 광학적 순수도는 100%이고 전환율은 81.0%이다. 재조합균은 Dutoxetine을 제조하는 핵심 중간체 (S)-N,N-dimethyl-3-hydroxy-(2-thienyl)-1-propanamine[(S)-DHTP]중에서 초기 응용을 얻었다. [결론] 균주 Kluyveromyce marxianus CGMCC 2.1977로부터 카르보닐기 환원효소 유전자를 클론하여 얻었으며 대장간균 중에서 성공적으로 발현하였고 또 비대칭 환원에도 응용될 수 있었다. |
| 원문URL | http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART68363718 |
| 첨부파일 |
추가정보
| 과학기술표준분류 | |
|---|---|
| ICT 기술분류 | |
| DDC 분류 | |
| 주제어 (키워드) | Carbonyl reductase,kluyveromyces marxianus,Asymmetric reduction,카르보닐기 환원효소,kluyveromyces marxianus,비대칭 환원 |