| 초록 |
목적 : 대장균(Escherichia coli) 티미딘 키나아제(thymidine kinase, tdk) 유전자를 함유한 재조합 플라스미드(recombinant plasmid)를 구축한 후 티미딘 키나아제의 성질에 대하여 연구하였다. 방법 : PCR 기술을 통하여 대장균 K-12 중에서 tdk 유전자를 증폭한 후, 발현 벡터 pET-28a(+)에 클론시켰다. 그리고 대장균 BL21(DE3) 중에 형질전환(transformation)시켜 재조합 균주(DTK)를 얻었다. 결과 : tdk 유전자를 성공적으로 증폭하였고, 또한 재조합 균주를 구축하였다. 결론 : 얻은 tdk 유전자의 전체 길이는 618bp이고, 재조합 균주는 대량의 가용성 티미딘 키나아제를 발현 시킬 수 있었다. 티미딘 키나아제의 효소 활성(enzymic activity)은 1,600 U/mg에 달하였으며, 효소 활성에 제일 적합한 온도, pH값은 각각 45℃, 8.0 이다. 그리고 티미딘 키나아제의 최적반응 조건은 농도가 50 mmol/L이고 pH값이 8.0인 완충용액(buffer solution), 30 U의 조효소(crude enzyme), 5 mmol/L의 염화마그네슘(magnesium chloride, MgCl 2 ), 5 mmol/L의 TR, 5 mol/L의 ATP 조건에서 100분 반응시키는 것이다. 최적 반응 조건에서 티미딜산(thymidylate)의 전환율(conversion rate)은 60%이상에 도달되었다. |
